地黃的組織培養及快速繁殖技術

地黃(Rehmannia glutinosa)為玄參科地黃屬多年生草本植物,是我國傳統的名貴中藥材之一,含地黃素、強心甙、多種有機酸和維生素、糖類等物質,具有強心、利尿、降血糖以及保護肝臟的作用。其根莖經不同的加工方法得到的生地、熟地屬清熱涼血類的藥物。生地具滋陰清熱、涼血止血功效,主治熱病煩躁、陰虛低熱、吐血、尿血、崩漏等症;熟地能滋陰補血,主治陰虛血少、目昏耳鳴、腰膝酸軟、遺精、閉經等症。含地黃的清涼滋補飲料啤酒、地黃精、地黃茶、地黃罐頭和用鮮地黃醃製的十香地黃菜等,加大了市場對地黃的需求。

目前地黃繁殖由於長期應用根莖進行營養繁殖,在種植中存在耗材量大、病毒感染、品種退化等問題,地黃資源遭受嚴重破壞,致使優質地黃藥材生產供應缺口較大。我們採用地黃根莖做外植體進行組培育苗技術開發,具有快速高效特點,將為解決藥用植物優質種苗組培工廠化生產技術,推進中藥材GAP建設提供一定的技術支撐和條件保障,對地黃生產的可持續發展起到積極的推動作用,對保護藥用植物資源和已經十分脆弱的生態環境意義重大。關於試管苗如何進一步形成肉質根莖尚需進一步研究。

1、外植體的採集及處理

於秋季(9~10月)挖取地黃地下直徑約1.0 cm左右、無病蟲害的健壯根莖,用洗滌靈和自來水沖洗乾淨,切成1.0~1.5 cm長的根段。在超淨工作台上用75%酒精漂洗30 s,0.1%昇汞消毒7~8 min,無菌水沖洗5~6次。

2、誘導外植體生長與分化

將消毒處理好的外植體用滅過菌的剪刀或解剖刀去除接觸過消毒液的斷面,露出新鮮組織。將根段及時接種到培養基MS 6-BA 0.05~2.0 mg/L NAA 0.01~0.5 mg/L上。注意不要下端朝上。接種好的材料在溫度24℃左右、光照12 h/d、光照強度1 500 lx下進行培養。接種1周後,開始在根上露出黃綠色芽點,15 d左右長出不定芽,30~40 d後芽長到2.0~3.0 cm。

3、繼代增殖

將上述芽苗取下,接種到培養基MS 6-BA 1.5 mg/L NAAO.1 mg/L上,10 d後芽苗基部產生芽叢(3~5個),20~30 d後新芽長至1.0~2.0 cm左右。每30 d左右繼代一次,增殖係數控制在3倍左右,在保持芽苗良好增殖同時,獲得壯苗。

4、生根與移栽

將高達3.0 cm左右、生長健壯的無根苗分成單株接種到培養基1/2MS NAA 0.05 mg/L上,一般15 d後可產生大量根系。當根長約1.0 cm時,便可馴化移栽。方法是先將試管苗置於溫度25℃、濕度75%的玻璃溫室中揭蓋煉苗3 d,然後用鑷子輕輕從瓶內取出小苗,用稀釋0.125%~0.142%藥液的百菌清洗去殘留的瓊脂培養基,再移栽到經過消毒處理的基質(珍珠巖:蛭石=1:1)中。移栽後溫度保持24~25℃、濕度80%以上,成活率可達90%以上。

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