金線蓮的離體快繁技術

金線蓮別名花葉開唇蘭,為蘭科開唇蘭屬多年生草本植物,是一種珍稀中草藥。有關部門測定發現,金線蓮中氨基酸組成成分含量、抗衰老活性微量元素的含量均高於國產和野生西洋參,在中藥界有藥王之稱。全草味甘,性涼,有清熱潤肺、消腫解毒的功效。用於治療肺熱咳嗽、肺結核、風濕性關節痛、胃炎、膀胱炎、腎炎、吐血、毒蛇咬傷;還可降低膽固醇,防止血壓升高等。

由於人們長期大量採挖和野生動物包括昆蟲的咬食,加之近年來的山地開發、生態資源的破壞,野生金線蓮數量大為減少,致使藥源緊缺,國內外市場供不應求。

金線蓮的種子發育不全,在自然條件下發芽率很低,傳統的分根扦插繁殖時間長、繁殖係數低,無法大量種植生產。而利用植物組織培養繁殖可大大提高繁殖速度,並有效地保護野生資源,解決中藥材來源匱乏的問題,滿足人們用藥的需要。

在培養基中添加馬鈴薯提取液來取代水解乳蛋白或其它有機複合物,既降低了成本,又取得了較好的培養效果。

一、離體快繁技術

1、外植體的準備

為了獲得較多的接種材料和降低污染率,可將植株剪成帶2~3節的插條扦插於細河沙與珍珠巖的混合基質中,澆透水,搭一塑料小拱棚,在棚上蓋上雙層遮陽網,使溫度保持在20~25℃,濕度在80%左右,25天生根發芽。當芽長到1cm左右時剪下,作為接種材料。采芽前15天左右不要澆水。也可以直接從產地取嫩枝作為外植體。

2、培養條件及馬鈴薯提取液的製作方法

以N6培養基為基本培養基。根狀莖誘導培養基:N6+6~BA0.5mg/L+NNA0.1mg/L+10%馬鈴薯提取液+0.08%活性炭;增殖培養基:N6+6~BA0.1mg/L+NNA0.2mg/L+10%馬鈴薯提取液+0.08%活性炭。上述培養基均加0.7%瓊脂和3%白糖,pH5.5~6.0。培養溫度20~25℃,每天光照12小時,光照度2000~2500Lx。

馬鈴薯提取液的製作方法:將未發芽的馬鈴薯去皮,按需制培養基量計算並稱量,用清水洗淨,切成厚2~3mm、長和寬分別為3~4cm的薄片,放入比需制培養基量少一些的清水中,大火煮開後15~20分鐘,用單層紗布過濾,其過濾液即為馬鈴薯提取液。

二。生長與分化

1、無菌材料的獲得

將金線蓮嫩枝上的葉片去掉,留1~2mm長的葉柄以保護腋芽;把嫩枝剪成單節莖段,然後將莖段和芽用洗衣粉液搖洗,再用清水洗淨,放自采水下沖洗 30分鐘以上。在無菌條件下用75%乙醇浸泡30秒,轉到0.1%HgCl2液中滅菌5~6分鐘,再用無菌水搖洗3~4次,接種到根狀莖誘導培養基上,每瓶接1個莖段或1個芽。

2、根狀莖的誘導及芽的生長

接種在根狀莖誘導培養基上的莖段從第3周開始長出嫩綠色尖尾狀的腋芽;1個月時腋芽長成根狀莖;75~90天後,根狀莖長2~5cm,有節3~4個,根狀莖的下部葉呈鱗片狀,上部的1~2片葉為真葉。以芽為夕隨體的,接入10天時生根,芽開始生長;1個月時芽長成高2cm左右的小苗,葉色為它本有的紫黑色;75~90天時小苗高7~8cm,有3~4個節,2~3條根。此時可轉接並進入增殖培養階段。

3、根狀莖及小苗的增殖

將在根狀莖誘導培養基上培養了75~90天的根狀莖及小苗,剪成段(1節1段),轉接在增殖培養基上,1瓶接5~6個節段或芽。接入7天後,根狀莖開始生長,並逐漸長成成束的根狀莖;75~90天後,每束有根狀莖3~7條,每條根狀莖上有3~4個節,下部節上的葉為鱗片狀,上部的為真葉。直立莖段、芽及根狀莖上剪下的頂芽,在增殖培養基上培養7天,開始生根長芽,並逐漸長成直立的小苗;75~90天後,小苗又長成高7~8cm、有3~4個節、2~3條根的完整植株。每75~90天為1個繼代增殖週期,每個繼代增殖週期的繁殖係數是:芽的繁殖係數為3~4,莖段的為9~28。

4、瓶苗的移栽

當苗高6~7cm、有2~3條根、根長1~3cm時可煉苗移栽。移栽前,將瓶苗移出培養室,放在實驗室中煉苗7~10天,然後打開封口膜,小心取出苗,洗掉根部的培養基,栽入細河沙與珍珠巖的混合基質中(細河沙︰珍珠巖=3︰1),並給它們搭一塑料小拱棚,在棚上蓋上雙層遮陽網,使溫度保持在20~25℃、濕度80%左右。栽後25天生根成活,成活率80%以上。

5、移栽苗的管理

金線蓮喜溫暖、濕潤、半陰的環境,通氣良好、偏酸的土壤。所以,除冬季外,其他季節均要蓋上遮陽網。氣候乾燥時要常向葉面噴水,每3~5天澆透水1次,使土壤保持濕潤。如果用自來水澆灌金線蓮,最好先將自來水存放2~3天後再澆。在生長季節,用0.3%尿素加0.2%磷酸二氫鉀和0.2%硫酸亞鐵灌根,每半個月澆灌1次,連續4~5次。冬季不施肥,少澆水,並保持棚溫在10℃以上。

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